Műszer/rendszer neve: Olympus - TIRF fluoreszcencia mikroszkóp
Műszer fizikai helye:
Élettudományi Központ, 2.045 Műszerszoba
Szervezeti Egység:
Damjanovich Sándor Sejtanalitikai Szolgáltató Labor, DE ÁOK Biofizikai és Sejtbiológiai Intézet
Műszerfelelős: Dr. Mocsár Gábor
Hozzáférés feltételei: A készülék használata a műszerfelelőssel történő egyeztetést követően lehetséges. A műszert csak a hozzá kapcsolódó specifikus oktatáson való részvételt követően engedélyezett használni.
Hozzáférési feltételeket, szolgáltatások árát tartalmazó honlap: link
Műszer specifikációi:
A mikroszkóp 4 lézerrel van ellátva (405, 491, 561, 647 nm). Az Andor iXon 897 EMCCD kamerával 20 ms-onként lehet képet rögzíteni. A mikroszkóp optikai osztóval van ellátva, melynek segítségével egyidejűleg lehet spektrálisan szeparált (pl. zöld és vörös) képeket felvenni a kamera CCD chipjének két felén. A vizsgálati rétegvastagság (az evaneszcens mező behatolási mélysége) automatikusan beállítható a beesési szög változtatásával mindegyik lézervonal esetén.
Műszer rövid ismertetése:
A teljes belső visszaverődéses fluoreszcencia mikroszkópia (total internal reflection fluorescence microscopy) sejtmembrán, membránközeli sejtorganellumok, fedőlemezre kitapadó minták sepcifikus, nagy érzékenységű vizsgálatára alkalmas módszer. A nagy NA-val rendelkező objektívből a gerjesztő fény a határszögnél nagyobb szögben érkezik az üveg-víz (fedőlemez-minta) határfelületre, így ott teljes visszaverődést szenved. A visszaverődés helyén megjelenő, exponenciálisan lecsengő ún. evaneszcens mező azonban a minta határfelületéhez közel eső rétegben lévő festékeket gerjesztheti (~100-200 nm mélységig), de a minta belsőbb rétegeibe nem jut el. Így pl. a sejtmembránból specifikus fluoreszcencia jelet kaphatunk igen alacsony háttér mellett. A módszer a konfokális mikroszkópiáét jelentősen meghaladó érzékenységgel rendelkezik felületvizsgálati alkalmazásokban (ligandkötődés, internalizáció, membránfehérjék és lipidek vizsgálata, stb.).
Mérési lehetőségek felsorolása:
- fixált és élősejtes mintában egyedi molekula detektálás
- intracellular trafficking
- kolokalizáció analízis
- TIRF (total internal reflection fluorescence) képalkotás
- többcsatornás fluoreszcencia képalkotás
Kép a műszerről:
