Új lehetőségek molekuláris patológiában: A Pannoramic Confocal multispektrális konfokális digitális patológiai szkenner
A magyar 3DHistech Kft. által gyártott Pannoramic Confocal egy olyan, a maga nemében első digitális patológiai szkenner, amely a hagyományos transzmissziós képalkotáson felül nemcsak multiplex fluoreszcens detektálást, hanem konfokális képalkotást is biztosít. A szkennert a stabilitás, pontosság, fényhatékonyság, linearitás, érzékenység és képminőség szempontjából vizsgáltuk és fejlesztettük tovább a 3DHistech Kft.-vel a GINOP-2.2.1-15-2017-00072 projekt keretében. Az X-Y stabilitás és a relokalizációs pontosság jóval a feloldás határa (≤50 nm) alatt volt. A fényáteresztés konfokális üzemmódban 4-5-ször nagyobb volt, mint egy konfokális lézer pásztázó mikroszkópé, amely hasonló számított konfokális intenzitások mellett lehetővé teszi a jel-zaj arány vagy a pásztázási sebesség növelését. A műszer intenzitás válaszfüggvénye lineáris volt (R² ≥0,9996). A kalibrált mérések azt mutatták, hogy indirekt jelölés alkalmazásával sejtenként ≥ 2000 molekula jól detektálható és leképezhető a sejtfelszínen. A pontkiterjedési függvényét (PSF) méretei valamivel nagyobbak és kevésbé szimmetrikusak, mint egy hagyományos CLSM elméleti PSF-e, de ezen paraméterek térbeli homogenitása lehetővé teszi, hogy minden egyes optikai útvonalra egy specifikus rendszer PSF-et nyerjünk, és azt a méréssel párhuzamosan elvégzett opcionális dekonvolúcióhoz felhasználjuk. Összességében a Pannoramic Confocal érzékeny, kvantitatív transzmissziós és konfokális detektálást biztosít optikai szeleteléssel és 3D rekonstrukcióval multiplex fluoreszcens mintákon, biztosítva nagy minták nagy sebességű szkennelését. A szöveti heterogenitás elemzése és a ritka események kimutatása új utakat nyit a szöveti metszetek, organoid kultúrák vagy nagyszámú tapadó sejt kvantitatív elemzéséhez.
Rebenku István, Bartha A. Ferenc, Katona Tamás, Zsebik Barbara, Antalffy Géza, Takács Lili, Molnár Béla, Vereb György
https://doi.org/10.1002/cyto.a.24675